一、技术原理
16S rRNA基因是细菌中高度保守的基因,包含有可变区和保守区,可变区的序列变异可以用于区分不同的细菌种类。
二、实验流程
Step1:样本收集(如土壤、粪便等)
Step2:提取样本总DNA
Step3:特异性引物扩增16s rRNA特定区域
Step4:PCR产物纯化
Step5:高通量测序
三、技术总结
确保样本在整个处理和运输过程中保持低温,以防止DNA降解;
避免样本的交叉污染,使用无菌技术进行操作;
确保PCR反应体系中不含有任何抑制剂;
在PCR扩增和测序前,对DNA样本进行严格的质量控制。
四、样本要如何准备?
土壤样本:取样5-10g放置在无菌离心管,至少3个取样点混合而成,干冰运输;
水体样本:体积5-10L,50 mL离心管分装,干冰运输;
粪便样本:人粪便3g,小鼠粪便0.5g,干冰运输;
唾液样本:2-3 mL唾液,干冰运输;
组织类样本:体积≥100 mg,干冰运输。
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