一、技术原理
ROS染色基于特定的荧光探针,如DCFH-DA,这些探针在未被氧化时无荧光或荧光较弱,但当它们与ROS反应后,会形成具有强荧光的产物。通过检测荧光强度,可以间接反映细胞内ROS的水平。
二、实验流程
Step1:细胞处理
Step2:ROS染色
Step3:检测分析
三、结果展示
四、技术总结
确保实验操作在无菌条件下进行,避免细胞污染;
探针孵育后,要彻底清洗细胞以去除未进入细胞内的探针,减少背景荧光;
根据细胞类型和实验条件优化探针的浓度和孵育时间;
避免光照,因为某些探针对光敏感,可能会影响荧光信号的稳定性。
五、样本要如何准备?
选取状态良好且快要长满的活细胞(大约 2×10^7),将细胞瓶内灌满完全培养基,打包时必需做防震处理,常温寄送。细胞株干冰运输,冻存管完全被干冰覆盖,做好防震处理。
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