一、技术原理
Sanger测序原理：使用DNA聚合酶和带有荧光标记的双脱氧核苷酸（ddNTP），ddNTP缺少3'-OH基团，能够终止DNA链的延伸。通过区分不同ddNTP的荧光标记，可以确定DNA链的序列。
TaqMan探针法原理： TaqMan探针5'端和3'端分别标记有报告荧光基团和淬灭基团。在PCR反应过程中，如果探针与模板DNA完全匹配，Taq聚合酶会将探针切割，使得荧光基团与淬灭基团分离，从而发出荧光信号。根据荧光信号的强度变化，可以判断样本的基因型。
SNaPshot法原理： 使用测序酶和荧光标记的ddNTP，通过延伸引物与PCR产物模板的反应，引物延伸一个碱基即终止。通过测序仪检测峰的移动位置和颜色，确定SNP位点和碱基种类，从而确定样本的基因型。
基因芯片法原理： 基因芯片法通过将大量已知序列的DNA探针固定在芯片上，然后与标记的样品DNA进行杂交。通过检测每个探针的杂交信号强度，可以获取样品DNA的序列信息。
质谱法检测SNP的原理：通过PCR扩增后的产物，加入特异延伸引物，在SNP位点上延伸1个碱基。然后将样品与芯片基质共结晶，通过质谱仪检测，根据质荷比分离并检测不同的分子质量，从而进行SNP分型。
二、实验流程
Step1：DNA提取
Step2：PCR扩增目标区域
Step3：SNP分型（芯片法、测序法等）
Step4：结果分析
三、技术总结
可根据需要选择不同的检测方法，尽量首选成本低、样品制备过程简单的方法；
Sanger测序等方法结果易受到干扰，导致数据不清晰，再考虑使用质谱等技术。
四、样本要如何准备？
细胞样本：细胞数1×10^7个，可以是细胞液或细胞沉淀，干冰运输；
组织样本：组织量≥100 mg，干冰运输；
血液样本：样品需使用EDTA抗凝，体积≥2.5 mL，低温运输，长时间运输需要干冰；
FFPE样本：FFPE 组织块低温运输；
PCR产物：DNA:体积≥20 μL，浓度≥50 ng/μL，低温运输。
