双荧光素酶报告-广州复锐西科生物医药科技有限公司

双荧光素酶报告

【简介】
荧光素酶报告基因是指以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。

详细内容交付标准

一、技术原理

通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。

二、实验流程

Step1：质粒构建

Step2：质粒转染入细胞

Step3：收集阳性细胞

Step4：裂解细胞，加入底物测定荧光素酶活性

Step5：计算相对荧光强度

三、结果展示

四、技术总结

细胞裂解后建议离心取上清，保证样本的均一性

需加入足量底物，保证底物的饱和

转染效率低可优化转染条件，用较易转染的质粒做阳性对照

确保转染质粒DNA的质量

反应工作液建议现用现配

五、样本要如何准备？

质粒或菌株：质粒不少于2 μg或甘油菌约100 μL，低温运输；

质粒DNA：体积≥50 μL，浓度≥200 ng/μL，低温运输；

活细胞：选取状态良好且快要长满的细胞（大约 2×10^7），将细胞瓶内灌满完全培养基，打包时必需做防震处理，常温寄送。寄送细胞株需要干冰运输，冻存管完全被干冰覆盖，做好防震处理。

R 实验原始数据

R 载体序列信息

R 实验结果报告