一、技术原理

    基于细菌细胞的生物特性。在表达过程中，目标蛋白的基因会被插入到表达载体中，该载体会被转化到细菌细胞中。转化后的细菌细胞会利用其自身的代谢机制表达目标蛋白。

二、实验流程

Step1：基因合成

Step2：构建表达载体

Step3：E. coli 表达菌株转化及筛选

Step4：目标蛋白表达及纯化

三、结果展示

四、技术总结

选择表达载体时，要根据所表达蛋白的最终应用考虑；

融合表达时在选择外源DNA同载体分子连接反应时，对转录和转译过程中密码结构的阅读不能发生干扰；

菌液OD值要小于1，否则细胞太浓太老不易破碎，质粒易丢失

诱导时间和温度最好做一个梯度，不同蛋白需摸索；

超声条件可视实际情况改变，只要使菌体裂解充分即可，即菌液清亮不粘稠。

五、样本要如何准备？

质粒或菌株：质粒不少于2 μg或甘油菌约100 μL，低温运输；

质粒DNA：体积≥50 μL，浓度≥200 ng/μL，低温运输；

提供相关资料及核酸蛋白序列。

注：客户提供表达载体须进行过转化、表达，证明有目的蛋白表达的新鲜或保存菌株，表达蛋白须带His、GST等标签

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