一、技术原理
PKH26染料通过与外泌体的脂质双层膜结合,使得外泌体带有荧光标记。这种标记使得外泌体可以在荧光显微镜下被观察和追踪,从而研究它们的摄取、转运和功能。
二、实验流程
Step1:外泌体分离
Step2:PKH26孵育
Step3:外泌体与目的细胞共培养
Step4:观察分析
三、结果展示
四、技术总结
需要优化PKH26的浓度,以确保有效标记同时减少对细胞的毒性;
孵育时间需要根据实验目的进行优化;
在实验过程中,应尽量减少光照时间,避免荧光染料的光漂白;
外泌体不宜多次冻融,以免破坏其结构和功能。
五、样本要如何准备?
活细胞:选取状态良好且快要长满的细胞(大约 2×10^7),将细胞瓶内灌满完全培养基,打包时必需做防震处理,常温寄送。细胞株干冰运输,冻存管完全被干冰覆盖,做好防震处理;
外泌体:浓度≥1×108 个/mL,干冰运输。
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