稳转株构建-广州复锐西科生物医药科技有限公司

稳转株构建

【简介】
构建稳定表达细胞株（稳转株）是分子生物学研究中的一项关键技术，能够让研究者在细胞中长期研究特定基因的功能。

详细内容交付标准

一、技术原理

稳转株构建通常涉及将目的基因或shRNA通过病毒载体（如慢病毒）或非病毒方法（如转座子）整合到宿主细胞的基因组中。这些外源序列能够在细胞分裂时稳定传递，从而实现长期表达。

二、实验流程

Step1：载体构建

Step2：病毒包装

Step3：病毒感染

Step4：筛选稳定细胞

Step5：单克隆细胞株

Step6：验证

Step7: 保存和扩增

三、结果展示

四、技术总结

确保实验操作在无菌条件下进行，避免细胞污染；

优化转染条件，包括转染试剂的用量、孵育时间和细胞密度；

选择合适的筛选标记和浓度，以确保有效筛选；

在单克隆化过程中，确保细胞的均一性和遗传稳定性；

验证稳转株时，使用多种方法确保结果的准确性。

五、样本要如何准备？

质粒或菌株：质粒不少于2 μg或甘油菌约100 μL，低温运输；

质粒DNA：体积≥50 μL，浓度≥300 ng/μL，低温运输；

活细胞：选取状态良好且快要长满的细胞（大约 2×10^7），将细胞瓶内灌满完全培养基，打包时必需做防震处理，常温寄送。细胞株干冰运输，冻存管完全被干冰覆盖，做好防震处理。

R 高清原始图片

R 鉴定结果报告

R 冻存管细胞/复苏细胞

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