一、技术原理
β-Gal染色利用了衰老细胞中β-半乳糖苷酶活性在pH 6.0左右时显著增加的特性。在这种条件下,X-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)作为底物,在β-半乳糖苷酶的催化下生成深蓝色产物,从而实现对衰老细胞的检测。
二、实验流程
Step1:细胞固定
Step2:β-Gal染色
Step3:孵育
Step4:观察分析
三、技术总结
确保在37°C下孵育,避免在含有二氧化碳的培养箱中进行,因为这可能会改变pH值,影响染色效果;
染色液需要现用现配,避免使用过期或变质的试剂;
染色过程中,可能需要根据细胞类型和实验条件优化染色时间和染色液浓度;
染色后,细胞可能会有结晶形成,这可能会影响观察,可以使用70%乙醇进行洗涤以去除结晶。
四、样本要如何准备?
选取状态良好且快要长满的活细胞(大约 2×10^7),将细胞瓶内灌满完全培养基,打包时必需做防震处理,常温寄送。细胞株干冰运输,冻存管完全被干冰覆盖,做好防震处理。
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