一、实验原理

    它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。

    在这种测定方法中有3种必要的试剂：

①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）；②酶标记的抗原或抗体（标记物）；③酶作用的底物（显色剂）。

    测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。 这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。其方法简单，方便迅速，特异性强。

二、实验方法

Step1: 将靶蛋白特异性捕获抗体附着在微孔板上

Step2: 添加与捕获抗体结合的靶蛋白的标准品和样品

Step3: 洗去未结合的物质

Step4: 添加与固定的靶蛋白结合的检测抗体

Step5: 洗掉多余的检测抗体并加入辣根过氧化物酶偶联物

Step6:添加辣根过氧化物酶底物间接检测结合蛋白

三、结果展示

四、技术总结

加样本和反应试剂时必须注意避免以下几点：

加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。需匀速加样，吸样时，加样枪需按到第一档，加样时，加样枪需直接按到底；

加样应直接加入反应孔底部，加在反应孔壁上易溅出会对邻近孔产生污染。尽量避免出现气泡；

反应试剂的加入时先要注意试剂的有效期，再注意滴加的角度和滴加速度。滴加太快易出现重复滴加在两孔之间。

五、样本要如何准备？

新鲜样品：0.1g新鲜组织（至少）或者加入蛋白裂解液，干冰运输；

细胞：细胞类型样本细胞数为1x10^6以上，干冰运输；

全血/血清样本：用抗凝管保存的外周血 5~10ml，骨髓1~3ml； -80℃保存不超半周的白细胞匀浆>400μl，每 400μl 加入 400μl Trizol。

R 实验原始下机数据

R 数据统计分析

R GraphPad作图

R 实验结果报告