一、技术原理
TaqMan探针法核心是探针分子，TaqMan探针是单链DNA，5’端偶联发光基团，3’端偶联淬灭基团，游离的完整探针是检测不到荧光信号的，发光基团发出的荧光会被淬灭基团吸收淬灭，探针被水解，发光基团和淬灭基团远离就可以检测到荧光信号。反应开始时，模板链经热变性解链形成单链，TaqMan探针优先跟模板链退火，引物随后退火到模板上，之后进行链的延伸，延伸过程中Taq酶发挥5’-3’外切酶活性，遇到探针会从5’端逐个碱基切除探针，发光基团会跟淬灭基团分开，因此荧光检测系统可以接收到荧光信号，每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，荧光信号的累积和PCR产物形成是同步的。
TaqMan探针法的特异性除了由引物提供，更由探针分子保证，因其退火温度更高，所以TaqMan探针法特异性更好，在一个反应体系中加入多条探针，可以做多个基因同时检测。
二、实验流程
Step1: 引物设计
Step2: RNA提取
Step3: 逆转录PCR
Step4: 实时荧光定量PCR反应
Step5: 数据分析
Step6: 组图
三、结果展示
四、样本如何准备？
新鲜样品：0.1g新鲜组织（至少）或者加入蛋白裂解液，干冰运输；
细胞：细胞类型样本细胞数为1x10^6以上，干冰运输；
全血/血清样本：用抗凝管保存的外周血 5~10ml，骨髓1~3ml； -80℃保存不超半周的白细胞匀浆>400μl，每 400μl 加入 400μl Trizol。
