一、技术原理
病毒包装通常涉及将含有目的基因的病毒载体质粒与包装质粒共转染入包装细胞(如HEK293T细胞),以产生病毒颗粒。这些病毒颗粒能够感染宿主细胞并将基因传递到宿主细胞中。
二、实验流程
Step1:细胞培养
Step2:质粒准备(含有目的基因的病毒载体质粒和包装质粒)
Step3:质粒转染
Step4:病毒收集纯化
Step5:病毒滴度测定
三、技术总结
确保包装细胞健康且无污染;
使用高质量的质粒DNA,避免质粒污染;
在无菌条件下进行操作,防止样本交叉污染;
病毒颗粒应在适当的温度下保存,通常为-80°C。
四、样本要如何准备?
质粒或菌株:质粒不少于2 μg或甘油菌约100 μL,低温运输;
质粒DNA:体积≥50 μL,浓度≥300 ng/μL,低温运输;
活细胞:选取状态良好且快要长满的细胞(大约 2×10^7),将细胞瓶内灌满完全培养基,打包时必需做防震处理,常温寄送。细胞株干冰运输,冻存管完全被干冰覆盖,做好防震处理。
R 高清原始图片
R 鉴定结果报告
R 冻存管细胞/复苏细胞