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MeRIP
【简介】
RNA甲基化免疫共沉淀(MeRIP)基于抗体特异性结合甲基化修饰的碱基的原理,以RNA免疫共沉淀富集甲基化修饰片段为基础,然后通过高通量测序,在全转录组范围内研究发生甲基化的RNA区域,高效获得结果。
详细内容 交付标准

一、技术原理

    其实验原理为使用抗甲基化抗体(如anti-m6A)特异识别目标甲基化修饰模式,形成抗体-RNA复合物,通过与免疫共沉淀相似的方法,使用琼脂糖微珠或磁珠捕获并富集具有目标甲基化修饰的RNA片段,纯化后利用qPCR或高通量测序分析所得的RNA序列。

二、实验流程

Step1:RNA提取

Step2:RNA片段化

Step3:免疫沉淀

Step4:protein A/G与抗体结合

Step5:RNA纯化回收

Step6:RNA反转录

Step7:qPCR或高通量测序

三、结果展示

merip.png

四、技术总结

MeRIP-seq实验的成功依赖于高质量的引物设计,因为引物的特异性和效率直接影响到实验结果的准确性;

根据实验需求筛选数据分析的方法,已有多种分析方法用于DMR的检测,但对这些方法的综合评估相对缺乏。

五、样本制备

细胞样本:细胞数1×10^7个,可以是细胞液或细胞沉淀,干冰运输;

组织样本:组织量≥100 mg,干冰运输。



R 高清原始图片

R 实验原始下机数据

R 数据统计分析

R GraphPad作图

R 引物序列

R 实验结果报告



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