一、技术原理
其实验原理为使用抗甲基化抗体(如anti-m6A)特异识别目标甲基化修饰模式,形成抗体-RNA复合物,通过与免疫共沉淀相似的方法,使用琼脂糖微珠或磁珠捕获并富集具有目标甲基化修饰的RNA片段,纯化后利用qPCR或高通量测序分析所得的RNA序列。
二、实验流程
Step1:RNA提取
Step2:RNA片段化
Step3:免疫沉淀
Step4:protein A/G与抗体结合
Step5:RNA纯化回收
Step6:RNA反转录
Step7:qPCR或高通量测序
三、结果展示
四、技术总结
MeRIP-seq实验的成功依赖于高质量的引物设计,因为引物的特异性和效率直接影响到实验结果的准确性;
根据实验需求筛选数据分析的方法,已有多种分析方法用于DMR的检测,但对这些方法的综合评估相对缺乏。
五、样本制备
细胞样本:细胞数1×10^7个,可以是细胞液或细胞沉淀,干冰运输;
组织样本:组织量≥100 mg,干冰运输。
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R 实验原始下机数据
R 数据统计分析
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R 实验结果报告