一、技术原理
EdU在DNA复制过程中被整合到新合成的DNA中,然后通过与荧光标记的叠氮化物发生共价反应,形成稳定的三唑环,从而通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到细胞增殖。
二、实验流程
Step1:细胞处理
Step2:EdU标记
Step3:细胞固定
Step4:通透处理
Step5:EdU显色
Step6:细胞核染色
Step7:观察分析
三、结果展示
四、技术总结
EdU的孵育时间应根据细胞类型和实验需求进行优化;
EdU和荧光标记的叠氮化物对光敏感,实验过程中应避光处理;
在每次染色步骤后,应充分洗涤以去除未结合的染料;
在细胞操作过程中应轻柔,避免对细胞造成损伤。
五、样本要如何准备?
选取状态良好且快要长满的活细胞(大约 2×10^7),将细胞瓶内灌满完全培养基,打包时必需做防震处理,常温寄送。细胞株干冰运输,冻存管完全被干冰覆盖,做好防震处理。
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