一、技术原理
流式周期技术基于细胞DNA含量的变化。在细胞周期的不同阶段,细胞的DNA含量会发生变化。G0/G1期细胞具有二倍体DNA含量,S期细胞的DNA含量逐渐增加,G2/M期细胞具有四倍体DNA含量。通过使用DNA结合染料(如碘化丙啶PI)染色,流式细胞仪可以检测细胞的DNA含量,从而分析细胞周期。
二、实验流程
Step1:细胞收集
Step2:细胞固定
Step3:RNA酶处理
Step4:细胞染色
Step5:流式细胞仪检测
Step6:数据分析
三、结果展示
四、技术总结
确保细胞在收集和处理过程中保持无菌条件。
固定细胞时,使用预冷的乙醇,并确保细胞均匀分散。
染色前,确保细胞完全重悬,避免细胞团块的形成。
流式检测时,避免过快的上样速度,以免细胞聚集。
五、样本要如何准备?
选取状态良好且快要长满的活细胞(大约 2×10^7),将细胞瓶内灌满完全培养基,打包时必需做防震处理,常温寄送。细胞株干冰运输,冻存管完全被干冰覆盖,做好防震处理。
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