一、技术原理
Live Dead细胞鉴定基于活细胞和死细胞对特定荧光染料的不同亲和力。活细胞具有完整的细胞膜,能够阻止某些染料进入,而死细胞的细胞膜受损,允许染料进入并发出特定颜色的荧光。例如,Calcein AM染料可以被活细胞内的酯酶转化为发出绿色荧光的钙黄绿素,而乙锭同源二聚体-1(Ethidium Homodimer-1)则能够进入死细胞并与DNA结合发出红色荧光。
二、实验流程
Step1:细胞处理
Step2:活、死细胞染料染色
Step3:避光孵育
Step4:洗涤细胞
Step5:观察分析
三、结果展示
四、技术总结
确保细胞健康,避免使用受损或老化的细胞;
遵循试剂盒说明书中的染色步骤和时间;
避免在染色过程中的光毒性,尽量减少细胞暴露于光线下;
确保在分析前彻底清洗细胞以去除未结合的染料。
五、样本要如何准备?
选取状态良好且快要长满的活细胞(大约 2×10^7),将细胞瓶内灌满完全培养基,打包时必需做防震处理,常温寄送。细胞株干冰运输,冻存管完全被干冰覆盖,做好防震处理。
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