一、技术原理
在细胞凋亡过程中,DNA会在核小体间发生断裂,形成大量的双链或单链DNA缺口。TUNEL染色通过末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)将带有荧光标记的dUTP连接到DNA的3'-OH末端,从而在显微镜下观察到凋亡细胞的特征性染色。
二、实验流程
Step1:样本固定
Step2:细胞通透
Step3:Tunel反应
Step4:封片和观察
三、结果展示
石蜡切片
细胞
四、技术总结
确保固定液的量充足,固定时间适当,以保持细胞形态和DNA完整性;
通透剂的处理时间不宜过长,以免过度破坏细胞结构;
TUNEL反应时间需严格控制,过长或过短都可能影响染色效果;
避免光照,因为荧光染料可能对光敏感。
五、样本要如何准备?
活细胞:选取状态良好且快要长满的细胞(大约 2×10^7),将细胞瓶内灌满完全培养基,打包时必需做防震处理,常温寄送。细胞株干冰运输,冻存管完全被干冰覆盖,做好防震处理;
FFPE样本:FFPE组织块低温运输;
冷冻切片:冷冻组织块干冰运输。
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